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進口基孔肯雅熱IgG檢測試劑盒(德國IBL)

簡要描述:

進口基孔肯雅熱IgG檢測試劑盒(德國IBL)可用于人血清和血漿(檸檬酸鹽)中基孔肯雅熱IgG抗體的定性檢測。

更新時間:2025-01-03

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基孔肯雅熱IgG檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:基孔肯雅熱IgG檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

英文名稱:Chikungunya Igmicro-capture ELISA

【產(chǎn)品規(guī)格】

96T

【預期用途】

試劑盒可用于人血清和血漿(檸檬酸鹽)中基孔肯雅熱IgG抗體的定性檢測。

 

【檢測原理】

試劑盒采用酶聯(lián)免疫法。微孔中預包被有抗人IgG,用于結合樣品中相應的抗體。洗板后,去除非結合的樣品。再加入基孔肯雅熱抗原液,再次洗板后,再加入生物素化的基孔肯雅熱抗體。加入鏈霉親和素標記結合物(酶聯(lián)物),與固相的特異性的基孔肯雅熱復合物結合。加入TMB底物液后,微孔中顯藍色。顯色的強度與病人樣品中基孔肯雅熱IgG抗體的量成正比。加入終止液終止酶反應,形成黃色終點產(chǎn)物。后在酶標儀處450 nm讀數(shù)。

【檢測方法】

試劑準備

試驗前,將所有試劑,樣品,質控品平衡至室溫(20~25)

基孔肯雅熱抗原:

每瓶加入1mL稀釋洗滌液溶解,緩慢加入,室溫下靜置溫育15min,制成即用型抗原液。此抗原液在2~℃可穩(wěn)定保存1天。

洗滌液:

1個單位的濃縮洗滌液+19個單位的雙蒸水。

如:10mL濃縮洗滌液+190 mL雙蒸水。稀釋洗滌液在室溫下能穩(wěn)定保存5天。開瓶后,濃縮的洗滌液在2~8℃可穩(wěn)定保存至有效期.

檢測步驟

試驗前,仔細閱讀說明書。嚴格執(zhí)行說明書要求才能得到優(yōu)質結果。如試驗使用自動洗板機,建議每孔350µL,洗板5次(如手工洗,則每孔300µL,洗板3次)。試驗前,確定好樣品,質控品的加樣布局方案。取所需板條置于板架上。

至少設

1孔(如A1)         空白對照

1孔 (如B1)          陰性質控

2孔 (如C1+D1)      臨界質控

1孔(如E1)         陽性質控

如覺得有必要,建議樣品和質控品都作雙份檢測。

試驗應按同樣的加樣順序加取試劑,避免不同的時間間隔造成誤差。

使用新的一次性加樣槍頭,加各質控品,樣品

調(diào)節(jié)恒溫箱為37±1

  • 50µL質控品和稀釋樣品至相應各孔中,設A1作為空白對照
  • 封板紙蓋板
  • 37 ± 1 溫育1小時±5分鐘
  • 溫育后,移除封板紙,倒出微孔內(nèi)液體,每孔用300µL稀釋洗滌液,洗板3次,避免洗滌液相互溢濺至其它微孔。每次洗板時,浸泡時間應大于5秒。后,在吸水紙上拍干,去除殘留液滴。

注意:洗滌步驟很關鍵。不充分的洗板,會導致不精確或錯誤上升的吸光度值。

  • 除空白對照孔(A1)外,加50µL基孔肯雅熱液抗原液至各孔,蓋板
  • 室溫下30分鐘
  • 重復步驟4
  • 除空白對照孔(A1)外,加50µL 基孔肯雅熱液抗體液至各孔,蓋板
  • 室溫下30分鐘
  • 重復步驟4
  • 除空白對照孔(A1)外,各加50µL鏈酶親和素酶聯(lián)物至各孔,蓋板
  • 室溫下30分鐘
  • 重復步驟4
  • 100 µL TMB底物液至各孔中
  • 黑暗處,精確溫育15分鐘
  • 按加TMB底物液的順序和速度,加100 µL終止液至各孔中。

藍色溶液在孵育過程中變?yōu)辄S色。

注意:強陽性樣品會導致色原產(chǎn)生沉淀,沉淀的產(chǎn)生會對讀數(shù)產(chǎn)生影響。所以先用陰性基質進行預稀釋,建議1:1的比例稀釋,然后,再1個單位的預稀釋樣品+100個單位的樣品稀釋液。終結果(以U計算)乘以預稀釋因子2即可

  • 加入終止液后,30分鐘內(nèi)在酶標儀450/620 nm處讀數(shù)

【結果計算】

用A1空白對照孔對酶標儀進行調(diào)零

如遇技術問題,酶標儀不能調(diào)零。 所測樣品的吸光度值減去空白對照的讀數(shù)值,

即可得到可靠的讀數(shù)。

在酶標儀處450 nm處測讀所有質控品和樣品的吸光度值。620 nm作為參考波長。

如進行雙孔檢測,計算吸光度均值。

實驗有效性標準

如試驗有效,必須滿足以下要求

·空白對照(A1):       吸光度值<  0.100

·陰性質控(B1):       吸光度值<  臨界讀數(shù)

·臨界質控(C1+D1)     吸光度值   0.150~1.300

·陽性質控(E1)        吸光度值>  臨界讀數(shù)

如上述標準沒滿足,試驗視為無效,試驗應重測。

結果計算

臨界讀數(shù)是雙孔臨界質控的吸光度均值

示范: 臨界吸光度值0.39 +臨界吸光度值0.37=0.76 / 2 = 0.38

即吸光度值=0.38

進口基孔肯雅熱IgG檢測試劑盒(德國IBL)

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