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登革熱IgM/IgG抗體檢測試劑盒

簡要描述:

登革熱IgM/IgG抗體檢測試劑盒
登革熱病毒是黃病毒屬,主要分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)。世界上一半以上的人口居住于具有登革熱潛在傳播風(fēng)險的地區(qū),登革熱是導(dǎo)致人類發(fā)病和死亡嚴(yán)峻的蟲媒病毒疾病1。登革熱病毒有4種不同但抗原相關(guān)的血清型,通過雌蚊(主要是埃及伊蚊、白紋伊蚊傳播和波利尼西亞斑蚊)傳播。

更新時間:2025-01-03

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登革熱IgM/IgG抗體檢測試劑盒


澳洲PANBIO登革熱抗原NS1快速檢測用于定性的快速檢測人群血清、血漿或全血中登革病毒的IgM及IgG抗體??稍?5分鐘內(nèi)檢測結(jié)果。

· 結(jié)果快速,15分鐘出結(jié)果。
· 結(jié)果值得信賴,敏感性和特異性均> 90%
· 方式靈活,樣本可為全血、血清或血漿
· 能區(qū)分出登革的原發(fā)感染和繼發(fā)感染
· 可進(jìn)行完整的測試,保存方便,常溫2-30℃保存


標(biāo)本采集和制備

靜脈穿刺獲取的血液應(yīng)該置于室溫(20-25)下直到凝塊形成,再按照臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化研究院(CLSI)的《認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)——診斷用血液標(biāo)本的靜脈穿刺采集程序,H3》離心。應(yīng)該盡快分離血清。如果在2天內(nèi)不進(jìn)行檢測,血清應(yīng)該2-8冷藏或者低于或等于- 20冷凍儲存。不*使用自解凍冷凍機儲存血清。不*使用黃疸血清,以及出現(xiàn)溶血、脂血或微生物生長的血清。CLSI提供了儲存血液標(biāo)本的建議,《認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)——血液標(biāo)本的處理加工程序,H18》。


檢測程序

注: 確保所有試劑在開始測定前平衡至室溫(20-25)。在所給時間和溫度范圍以外進(jìn)行測試可能產(chǎn)生無效的結(jié)果。不在預(yù)定時間和溫度范圍內(nèi)的測試必須進(jìn)行重復(fù)。


ELISA程序

  • 從鋁箔袋中取出所需數(shù)量的微孔板并插入測試條槽。陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品和校準(zhǔn)品各需5個微孔,一式三份。確保剩下未使用的微孔密封于鋁箔袋內(nèi)。

  • 使用適當(dāng)?shù)脑嚬芑蛭⒌味ò逑♂岅栃再|(zhì)控品(P)、陰性質(zhì)控品(N)、校準(zhǔn)品(CAL)和患者樣本。

    • 混合10μL血清與1000μL樣本稀釋劑?;旌暇鶆?。

或者,

  • 混合10μL血清與90μL樣本稀釋劑。取出20μL稀釋血清,加入180μL樣本稀釋劑?;旌暇鶆颉?/span>

  • 吸取100 µL樣本稀釋劑、質(zhì)控品和校準(zhǔn)品添加至對應(yīng)的微孔中。

  • 蓋住測定板并在37°C ± 1°C孵育30分鐘。

  • 用稀釋后的清洗緩沖液洗6次(參考清洗程序)。

  • 吸取100 µL HRP標(biāo)記抗人IgG添加到每個微孔中。

  • 蓋住測定板并在37°C ± 1°C孵育30分鐘。

  • 用稀釋后的清洗緩沖液洗6次(參考清洗程序)。

  • 吸取100 µL TMB添加到每個孔中。

  • 在室溫(20-25)下孵育10分鐘,從第①次添加開始計時。藍(lán)色將會顯現(xiàn)。

  • 按照相同順序吸取100μL終止液添加到每個孔中,計時同TMB添加步驟?;旌暇鶆?。藍(lán)色將變成黃色。

  • 在30分鐘內(nèi)讀取每個孔在450nm波長的吸光度,參考濾波器為600-650nm。

注: 如果使用雙波長分光光度計,將參考濾波器設(shè)定在600-650nm之間。在沒有參考濾波器的情況下讀取450nm的微孔結(jié)果可能由于背景原因?qū)е挛舛绕摺?/span>


清洗程序

為了清除未復(fù)合的樣本或成分,有效清洗是ELISA程序的關(guān)鍵步驟。

A.自動洗板機

  • *抽凈所有微孔。

  • 在清洗循環(huán)期間將每個孔裝滿至邊緣(350μL)。

  • 完成6次清洗后,將測定板倒立于吸水紙巾上用力敲打,確保清除所有清洗緩沖液。

  • 為了確保有效清洗,必須維持自動洗板機良好的保養(yǎng)。必須始終遵守廠商的清潔說明。

B.手動清洗

  • 將測定板的內(nèi)含物丟棄到適當(dāng)?shù)膹U物容器。

  • 用適當(dāng)?shù)臄D壓瓶將微孔填滿清洗緩沖液。避免清洗緩沖液起泡,否則會降低清洗效率。立即丟棄微孔里的清洗緩沖液。

  • 再將微孔填滿清洗緩沖液,并立即丟棄。

  • 重復(fù)步驟(3)4次,共用清洗緩沖液清洗六(6)次。

  • 后一次清洗完成后,丟棄微孔的內(nèi)含物并將測定板置于吸水紙巾上敲打,以確保清除所有清洗緩沖液。


質(zhì)量控制

每個試劑盒包含校準(zhǔn)品,陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品。這些組成的可接受值參見附帶的規(guī)格表。陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品用于監(jiān)測重大的試劑失敗。陽性質(zhì)控品不能確保測定臨界值的精密度。如果質(zhì)控品或校準(zhǔn)品的任一吸光度讀數(shù)不符合規(guī)定,則測試無效且應(yīng)重新測試。如果測試無效,則不能報告患者結(jié)果。必須按照地方、州和/或聯(lián)邦法規(guī)或認(rèn)證要求以及實驗室標(biāo)準(zhǔn)QC程序執(zhí)行質(zhì)控(QC)要求。有關(guān)適當(dāng)?shù)腝C操作規(guī)程指南,建議用戶參考CLSI C24-A和42 CFR 493.1256。


預(yù)期值和測試局限性

  • 必須結(jié)合患者的臨床體征和癥狀來做臨床診斷。該試劑盒的結(jié)果本身并沒有診斷作用,應(yīng)該與其他臨床數(shù)據(jù)和患者癥狀聯(lián)用。

  • 陽性預(yù)測值取決于病毒存在的可能性。只能檢測有臨床癥狀或疑似接觸過相關(guān)病毒的患者。

  • 黃病毒屬內(nèi)的血清交叉反應(yīng)(登革熱1、2、3、4,日本腦炎西尼羅河病毒,墨累山谷腦炎等)在IgG, 水平上十分常見3,4,5。在東南亞進(jìn)行的試驗表明90%的日本腦炎患者(n=20)的IgG間接結(jié)果大于10 Panbio單位。

  • 利用地方人群測定了臨界值。 人群血清流行病學(xué)在不同地理區(qū)域應(yīng)該隨時間而變化。終,臨界值需要根據(jù)對當(dāng)?shù)氐难芯窟M(jìn)行調(diào)整。

  • 尚未確定目測結(jié)果判定的性能特征。

  • ELISA篩選試驗結(jié)果表明登革熱感染的所有血清必須送到參考實驗室進(jìn)行陽性確認(rèn)和流行病學(xué)記錄。


性能特征

Panbio Dengue IgG Indirect ELISA386份經(jīng)過血凝抑制試驗HAIELISA方法的回顧性血清進(jìn)行檢測。這些血清包括來自以下組別的樣本:108份血清陰性樣本、84份原發(fā)性樣本、94份繼發(fā)性樣本和100份地方性樣本。 通過Panbio Dengue IgG Indirect ELISA 對這些血清樣本進(jìn)行檢測并將其結(jié)果與血清的登革熱感染狀態(tài)進(jìn)行對比,從而確定檢測靈敏度、特異性和一致性。

馬來西亞的一所大學(xué)通過基于世界衛(wèi)生組織(WHO)標(biāo)準(zhǔn)的HAI試驗將115份血清樣本確定為原發(fā)性或繼發(fā)性登革熱感染。 試驗組由23份原發(fā)性和92份繼發(fā)性登革熱樣本構(gòu)成。

登革熱IgM/IgG抗體檢測試劑盒


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